Kit Effet antibactérien du virus T4 et détection par amplification par PCR

Sujets abordés :
- Découvrir les bactériophages, acteurs essentiels à l’équilibre des microbiotes
- Réaliser un antibiogramme
- Réaliser une amplification par PCR d’un virus

Effet antibactérien du virus T4 :
Comparer in vitro l’effet bactéricide des bactériophages à celui de deux antibiotiques. Cette activité reprend le principe d’un antibiogramme. Une boite de culture d’E. coli est divisée en 4 zones : 2 antibiotiques sont testés en comparaison d’une goutte d’une solution (bactériophages), le 4ème quart est la zone témoin.
L’expérience dure 1 séance de 60 min, un temps d’incubation des bactéries de 3 jours et 1 séance de lecture des résultats. Les réactifs sont livrés pour 40 boîtes.

PCR de détection du virus T4 :
Les résultats du TP1 montrent qu'un élément, non visible au microscope et présent dans la suspension déposée, produit des plages d'inhibition de la croissance bactérienne équivalente à celles de certains antibiotiques. L'analyse PCR va permettre de déterminer la présence d'un gène viral dans la suspension et que donc cet effet bactéricide est dû à un virus : le bactériophage T4.
L’expérience dure 2 séances de 60 min. Les réactifs sont livrés pour 20 PCR.

 À partir des solutions de bactériophages des deux expériences, il est possible de faire le titrage des bactériophages en suspension avec du tampon PBS. On visualise ainsi que chaque micro-plage de lyse est le résultat de l’action d’un seul virus.

Composition :
- Effet antibactérien : Milieu Mueller Hinton 1L, 1 tube inoculum Escherichia coli (type k12) lyophilisée, eau stérile (50 ml), bactériophages T4, Disques d’antibiotiques (pénicilline et tétracycline), 40 boites de Pétri, 40 pipette Pasteur 1 ml, 40 râteaux
- PCR : Amorces prêt à l'emploi, Mix PCR [Nucléotides + Taq polymérase], bactériophages T4, DNA release, marqueur de poids moléculaire, tampon d'extraction, 20 microtubes PCR
- Titration : tampon PBS
Matériel complémentaire nécessaire : Micropipettes P20 et embouts, système d’électrophorèse phorEasy réf. 708150, thermocycleur à module Peltier réf. 591110, tampon TAE, agarose, colorant GelGreen®