Kit Test ELISA Déterminer la concentration d’un anticorps dans une solution

Sujets abordés :
- Réaliser un protocole de dosage colorimétrique (application en diagnostique médicale)
- Vaccination et réponses adaptatives du système immunitaire face à un agent pathogène
- Relation antigène-anticorps

Principe et objectif :
Réaliser un protocole d’immunodosage afin de déterminer la quantité d’anticorps spécifiques ayant réagi avec les antigènes fixés sur le fonds des cupules fournies, et ce, avec une sensibilité de l’ordre du μg/ml. Le dosage est réalisé grâce à une gamme étalon qui permet d’établir une échelle de teintes de référence.
L’objectif est de déterminé la concentration d’anticorps présent dans un échantillon de sérum pour savoir si l’individu est immunisé ou pas face à l’antigène étudié.
L’expérience dure 1 séances de 50 min. Les réactifs sont livrés pour 24 binômes.

Composition :
24 barrettes de 8 cupules « tapissées » de BSA (antigène), 2 supports de barrettes, 1 tube de sérum de lapin immunisé anti-BSA, 1 tube de sérum de lapin non immunisé, 1 tube d’anticorps réactifs secondaires couplés à 1 enzyme, solution Tween, tampon de dilution PBS 10x, 1 tube de substrat de l'enzyme (TMB)
Matériel complémentaire nécessaire : Micropipettes P20 et embouts

Commentaires :
Nous vous proposons un test ELISA réaliste comme en laboratoire. Pour aller plus loin dans l’expérience, en fin de manipulation, chaque groupe pourra prendre une photo de la barrette (avec un smartphone par exemple). A l’aide d’un logiciel de traitement de l’image (Mesurim), ils réaliseront une courbe d’étalonnage afin de déterminer plus précisément la concentration en anticorps du sérum et valider leur première conclusion déterminée visuellement.