Kit Étude de l’endosymbiose par PCR de la RuBisCO

Sujets abordés :
- Principe de la PCR et étude de l’endosymbiose
- Étude de l’expression de deux gènes (nucléaire et chloroplastique) codant pour l’enzyme RuBisCO
- Réalisation et analyse d’un gel d’électrophorèse d’ADN

 Principes et objectifs : De nombreux éléments scientifiques étayent la théorie selon laquelle les chloroplastes sont dérivés d’une cyanobactérie intégrée dans une cellule eucaryote ancestrale et que les gènes de la bactérie endosymbiotique auraient été transférés en grande partie dans le génome de la cellule eucaryote constituant un exemple de transfert horizontal.
Peut-on mettre en évidence, une preuve de ce transfert de matériel génétique du génome chloroplastique vers génome nucléaire de la cellule végétale ? On se propose de rechercher par la technique d’amplification par PCR, la présence des gènes codant les sous-unités S et L de la RuBisCo chez des plantes comme le radis (Raphanus sativus) ou le chou-fleur (Brassica oleracea variété botrytis).
L’expérience dure 2 séances de 60 min. Les réactifs sont livrés pour 20 PCR.

Composition : Amorces prêt à l'emploi, mix PCR [Nucléotides + Taq polymérase], DNA release, marqueur de poids moléculaire, tampon d'extraction, microtubes PCR, micro-pilons.
Matériel complémentaire nécessaire : Micropipettes P20 et embouts, système d’électrophorèse phorEasy réf. 708150, thermocycleur à module Peltier réf. 591110, tampon TAE, agarose, colorant GelGreen®

Commentaires : Un dossier d’expérience est disponible sur notre plateforme numérique pour préparer l’expérience, suivre pas à pas le protocole et investiguer. L’activité peut être complétée par l’analyse des séquences nucléotidiques et protéiques de la RuBisCO chez différentes espèces pour reconstruire en partie l’histoire évolutive de ces espèces ou encore par la recherche du type de bactéries qui s’est associé à une cellule eucaryote et a donné naissance aux chloroplastes des plantes et algues vertes. Sur le même sujet est disponible un kit ADN prêt à déposer où les élèves n’ont que l’électrophorèse à analyser, réf. 117231.