Kit Transgénèse de la levure S. cerevisiae et détection par PCR de la GFP

Sujets abordés :
- Apprendre à travailler en conditions stériles dans un laboratoire de microbiologie
- Réaliser un transfert de gène inter-espèce
- Mesurer l’expression de la protéine GFP sur milieu sélectif
- Réaliser un protocole complet de PCR

TP Transgénèse 
Principes et objectifs : Jeulin a conçu un protocole qui ne nécessite pas de rendre les cellules compétentes. Il suffit de remettre en suspension des cellules de levures fraîches à partir d'une colonie, de mélanger avec la solution de transformation et l'ADN plasmidique, d'agiter (vortex) puis de laisser incuber 30 min à 42°C. Les levures sont ensuite mises en culture pour vérifier l'efficacité du transfert, puis la révélation de l'expression du gène de la bioluminescence est réalisée en éclairant les boîtes aux rayonnements UV.
Cette expérience dure environ 120 min + 1 séance de lecture de résultats
Composition : Souche de levures sur boîte, milieu prêt à couler YPD et URA -, boîtes de Pétri, râteaux, bâtonnets stériles, microtubes stériles

TP PCR
Principes et objectifs : Vérifier par amplification PCR la présence du gène GFP responsable de la fluorescence d’une levure transformée.
Expérience en 3 temps : extraction/purification de l’échantillon, amplification par PCR et électrophorèse sur gel d'agarose.
L’élève peut aussi tester les souches obtenues grâce au TP Transgénèse. Le protocole et les amorces sont compatibles.
Pour cette expérience prévoir 2 séances de 60 min. Le kit est prévu pour 20 PCR.
Composition : Microtubes PCR, amorces, réactifs PCR prêt à l'emploi, 2 souches de levure, échelle de poids moléculaire

Commentaires : Nous vous proposons deux kits qui sont réalisables séparément ou l’un après l’autre pour une expérimentation complète liant protéomique et génomique dans un laboratoire de microbiologie.